Belangrijke laboratoriumreferentie: Toegestane aanpassingsbereiken voor HPLC en GC in ChP, USP, Ph.Eur.

Nationale farmacopees bieden standaard testmethoden voor routinematig laboratoriumwerk. Hoewel ze ogenschijnlijk strikte bepalingen bevatten, zijn bepaalde aanpassingen toegestaan. Dit artikel bespreekt de toegestane aanpassingsmarges voor chromatografische testen zoals gespecificeerd in een aantal veelgebruikte farmacopees.

Chinese Farmacopee
Stationaire fase: De fysisch-chemische eigenschappen van het verpakkingsmateriaal mogen niet worden gewijzigd, inclusief het substraatmateriaal, oppervlaktemodificatie en de gebonden fase. Overgang van volledig poreuze deeltjes naar oppervlakkig poreuze deeltjes is toegestaan ​​wanneer aan bovenstaande voorwaarden is voldaan.
Deeltjesgrootte (dp) en kolomlengte (L): Na het wijzigen van de deeltjesgrootte of de kolomlengte moet de L/dp-waarde (of iV-waarde) binnen ‒25% ~ +50% van de oorspronkelijke waarde vallen.
Debiet: Als de binnendiameter van de kolom of de deeltjesgrootte van het vulmateriaal verandert, bereken dan het debiet met behulp van de bijbehorende formule.
[Formule weggelaten]
Verdere aanpassingen kunnen worden gedaan op basis van de werkelijke systeemdruk en verblijftijd. Bij isocratische elutie kan de stroomsnelheid tot ±50% worden aangepast. Bij gradiëntelutie moeten aanpassingen uitsluitend volgens de formule worden uitgevoerd; een groter aanpassingsbereik is niet toegestaan.
Injectievolume: Aanpassen om te voldoen aan de systeemgeschiktheidseisen. Indien de kolomafmetingen worden gewijzigd, berekent u het injectievolume met behulp van de bijbehorende formule en stemt u dit nauwkeurig af op basis van de gevoeligheidseisen.
[Formule weggelaten]
Gradiëntelutieprogramma: Handhaaf identieke elutievolume-multiples voor kolommen met verschillende specificaties om consistente gradiëntprofielen te garanderen. Houd rekening met verschillen in het verblijfsvolume van het systeem tussen de instrumenten.
[Formule weggelaten]
Mobiele faseverhouding:
Isocratische elutie: De minderheidscomponent van de mobiele fase kan worden aangepast met een relatieve waarde van ±30% of een absolute waarde van ±2%, afhankelijk van welke waarde de grootste waarde oplevert. Het aandeel van deze minderheidscomponent moet kleiner zijn dan (100/n)%, waarbij n = aantal componenten van de mobiele fase.
Gradiëntelutie: De verhoudingen van de componenten in de mobiele fase kunnen enigszins worden aangepast om te voldoen aan de geschiktheidscriteria van het systeem. De elutiekracht van de uiteindelijke samenstelling van de mobiele fase mag niet zwakker zijn dan die van de oorspronkelijke gradiënt.
Concentratie van het bufferzout in de mobiele fase: instelbaar binnen ±10%.
Kolomtemperatuur: Tenzij anders aangegeven, ±10 °C voor isocratische elutie; ±5 °C voor gradiëntelutie.
pH-waarde: Tenzij anders vermeld, mag de pH van de waterige mobiele fasecomponent worden aangepast binnen ±0,2 pH-eenheden.
Detectiegolflengte: Niet aan te passen.
Opmerkingen:
F1 = debiet zoals gespecificeerd in de monografie; F2 = aangepast debiet
dc1 = oorspronkelijke binnendiameter van de kolom; dc2 = aangepaste binnendiameter van de kolom
dp1 = oorspronkelijke deeltjesgrootte van de pakking; dp2 = aangepaste deeltjesgrootte van de pakking
L1 = oorspronkelijke kolomlengte; L2 = aangepaste kolomlengte
Vinj1 = oorspronkelijk injectievolume; Vinj2 = aangepast injectievolume
tG1 = oorspronkelijke gradiënttijd; tG2 = aangepaste gradiënttijd
Farmacopee van de Verenigde Staten
pH van de mobiele fasebuffer (HPLC): Aanpassen binnen ±0,2 pH-eenheden of binnen het gespecificeerde bereik; van toepassing op zowel isocratische als gradiëntelutie.
Concentratie van het bufferzout in de mobiele fase (HPLC): ±10% (mits de pH acceptabel blijft); geldt voor zowel isocratische als gradiëntelutie.
Verhouding van componenten in de mobiele fase (HPLC): Voor componenten die ≤50% van het volume van de mobiele fase uitmaken, is een relatieve aanpassing van ±30% toegestaan. De absolute aanpassing van een afzonderlijke component mag echter niet meer dan ±10% van de totale samenstelling van de mobiele fase bedragen. Bij ternaire mobiele fasen moet elke component afzonderlijk worden aangepast; bij binaire mobiele fasen gelden de aanpassingen voor de component met de minste componenten. Voorbeelden van binaire en ternaire systemen worden hieronder weergegeven:
Binair voorbeeld 1: Mobiele faseverhouding 50:50. Een relatieve verandering van 30% voor de 50%-component is gelijk aan 15%, wat de absolute samenstellingslimiet van ±10% overschrijdt. Daarom is de aanpassing beperkt tot ±10% absoluut; toegestaan ​​bereik: 40:60 ~ 60:40.
Binair voorbeeld 2: Mobiele faseverhouding 2:98. Een relatieve verandering van 30% voor de 2% minderheidscomponent is gelijk aan 0,6%, wat voldoet aan de limiet van ±10% voor de absolute samenstelling. Toelaatbaar bereik: 1,4:98,6 ~ 2,6:97,4.
Ternair voorbeeld: Mobiele faseverhouding 60:35:5. Een relatieve verandering van 30% voor de component van 35% levert 10,5% op, wat de absolute samenstellingslimiet van ±10% overschrijdt. De aanpassing voor deze component is daarom beperkt tot ±10% absoluut. Een relatieve verandering van 30% voor de minderheidscomponent van 5% levert 1,5% op. Aanvaardbare aanpassingsbereiken: 50:45:5 ~ 70:25:5 of 58,5:35:6,5 ~ 61,5:35:3,5.
UV-detectiegolflengte (HPLC): De in de monografie vermelde golflengte mag niet worden gewijzigd. Op basis van specificaties van de detectorfabrikant of afzonderlijke validatiegegevens mag de meetfout van de golflengte niet meer dan ±3 nm bedragen.
Stationaire fase:
Kolomlengte (GC): Instelbaar binnen ±70%.
Kolomlengte (HPLC): Zie het gedeelte over de deeltjesgrootte.
Binnendiameter van de kolom (HPLC): Toegestaan ​​indien de lineaire snelheid behouden blijft; zie het gedeelte over de HPLC-doorstroomsnelheid.
Binnendiameter van de kolom (GC): Maximale aanpassing ±50%.
Filmdikte (capillaire GC-kolommen): Instelbaar van -50% tot +100%.
Deeltjesgrootte (HPLC): Zowel de deeltjesgrootte als de kolomlengte kunnen worden aangepast. De L/dp-verhouding moet constant blijven of binnen −25% tot +50% van de referentiewaarde liggen. Voor oppervlakkig poreuze deeltjes zijn alternatieve combinaties van kolomlengte (L) en deeltjesgrootte (dp) acceptabel, mits het theoretische schotelgetal (N) binnen −25% tot +50% van de referentiekolom ligt.
Houd er rekening mee dat hogere theoretische schotelgetallen kleinere piekvolumes opleveren. Extra-kolom piekverbredende factoren (bijv. slang, detectorcelvolume, bemonsteringsfrequentie, injectievolume) moeten daarom worden geoptimaliseerd. Wanneer de deeltjesgrootte niet in de monografie is gespecificeerd, bereken dan L/dp met behulp van de maximale deeltjesgrootte van de referentiekolom.
Deeltjesgrootte (GC): De deeltjesgrootte kan worden verhoogd of verlaagd, mits aan de systeemgeschiktheidseisen wordt voldaan en de verhouding tussen de deeltjesgroottebereiken (maximale deeltjesdiameter ÷ minimale deeltjesdiameter) ongewijzigd blijft.
Debiet (GC): Instelbaar tot ±50%.
Stroomsnelheid (HPLC): De stroomsnelheid moet opnieuw worden berekend wanneer de deeltjesgrootte verandert; kolommen met kleinere deeltjes vereisen een hogere lineaire snelheid om de prestaties te behouden. Correlateer de stroomsnelheid, de binnendiameter van de kolom en de deeltjesgrootte met behulp van de opgegeven formule.
[Formule weggelaten]
Bij isocratische elutie: Wanneer de deeltjesgrootte verandert van ≥3 μm naar Bij gradiëntelutie zijn aanpassingen aan de stroomsnelheid, de binnendiameter van de kolom en de deeltjesgrootte niet toegestaan.
Bovendien is de aanpassing van de stroomsnelheid met ±50% alleen van toepassing op isocratische elutie.
Opmerkingen:
F1 = debiet zoals gespecificeerd in de monografie; F2 = aangepast debiet
dc1 = oorspronkelijke binnendiameter van de kolom; dc2 = aangepaste binnendiameter van de kolom
dp1 = oorspronkelijke deeltjesgrootte van de pakking; dp2 = aangepaste deeltjesgrootte van de pakking
Europese Farmacopee
Vloeistofchromatografie — Isocratische elutie
Samenstelling van de mobiele fase: De minderheidscomponent kan worden aangepast met een relatieve tolerantie van ±30% of een absolute tolerantie van ±2%, afhankelijk van welke waarde groter is.
pH-waarde van de mobiele fase: Tenzij anders vermeld in de monografie, mag de pH van de bereide mobiele fase worden aangepast binnen ±0,2 pH-eenheden ten opzichte van de gespecificeerde waarde of het opgegeven bereik. Voor niet-ioniseerbare (neutrale) analyten mag de pH worden aangepast binnen ±1,0 pH-eenheid.
Bufferzoutconcentratie: De zoutconcentratie van waterige bufferoplossingen die worden gebruikt voor de bereiding van de mobiele fase kan binnen ±10% worden aangepast.
Debiet: Algemeen instelbereik ±50%. Bij wijziging van de kolomafmetingen zijn grotere aanpassingen toegestaan; bereken dit met behulp van de gegeven formule.
[Formule weggelaten]
Kolomparameters
Stationaire fase: De eigenschappen van de stationaire fase mogen niet worden gewijzigd (C8 kan bijvoorbeeld C18 niet vervangen).
Deeltjesgrootte: Mag met maximaal 50% worden verkleind; een verhoging is niet toegestaan.
Kolomlengte: Instelbaar binnen ±70%.
Binnendiameter van de kolom: instelbaar binnen ±25%.
Kolomtemperatuur: Tenzij anders vermeld, instelbaar binnen ±10 °C ten opzichte van de opgegeven temperatuur.
Detectiegolflengte: Niet aan te passen.
Injectievolume: Mag worden verlaagd indien de piekgevoeligheid en herhaalbaarheid bevredigend zijn; verhoging is niet toegestaan.
Vloeistofchromatografie — Gradiëntelutie
Kleine aanpassingen aan de samenstelling van de mobiele fase / het gradiëntprogramma zijn toegestaan ​​als aan alle volgende voorwaarden is voldaan:
- Aan de systeemgeschiktheidseisen is voldaan;
- De retentietijd van de hoofdpiek ligt binnen ±15% van de oorspronkelijke retentietijd;
- De elutiekracht van de uiteindelijke mobiele fase is niet zwakker dan die van de oorspronkelijke gradiënt.
Als de geschiktheid van het systeem niet kan worden bereikt, onderzoek dan de effecten van het verblijfvolume of overweeg een andere kolom.
Verblijfsduur: De instrumentconfiguratie heeft een sterke invloed op de resolutie, retentietijd en relatieve retentietijd; een te grote verblijfsduur is een veelvoorkomende oorzaak van afwijkingen. Monografieën bevatten vaak een isocratische pauze vóór de start van de gradiënt. Omdat de verblijfsduur verschilt tussen instrumenten voor methodeontwikkeling en instrumenten voor praktisch gebruik, moet de duur van de gradiënt toereikend zijn. Gebruikers dienen de duur van de isocratische pauze te controleren tijdens de methodevalidatie.
Wanneer in de monografie een verblijfsvolume is gespecificeerd, moet het initiële elutietijdstip (t _min ) worden vervangen door het aangepaste tijdstip (t _cmin ), berekend met de gegeven formule.
[Formule weggelaten]
Waar:
D = verblijfsvolume (mL); D₀ = verblijfsvolume tijdens methodeontwikkeling (mL); F = stroomsnelheid (mL/min).
Als de methodevalidatie deze stap niet omvat, kan de beschrijving van de isocratische hold voor dit doel worden weggelaten.
pH-waarde van het bufferzout: niet aan te passen.
Bufferzoutconcentratie: niet aan te passen.
Debiet: Aanpassing is toegestaan ​​wanneer de binnendiameter van de kolom verandert; zie de formule voor het debiet.
[Formule weggelaten]
Kolomparameters
Stationaire fase: De eigenschappen van de stationaire fase mogen niet worden gewijzigd (C8 kan bijvoorbeeld C18 niet vervangen).
Deeltjesgrootte: niet aan te passen.
Kolomlengte: Instelbaar binnen ±70%.
Binnendiameter van de kolom: instelbaar binnen ±25%.
Kolomtemperatuur: Tenzij anders vermeld, instelbaar binnen ±5 °C ten opzichte van de opgegeven temperatuur.
Detectiegolflengte: Niet aan te passen.
Injectievolume: Mag worden verlaagd indien de piekgevoeligheid en herhaalbaarheid bevredigend zijn; verhoging is niet toegestaan.
Opmerkingen:
F1 = debiet zoals gespecificeerd in de monografie; F2 = aangepast debiet
dc1 = oorspronkelijke binnendiameter van de kolom; dc2 = aangepaste binnendiameter van de kolom
L1 = oorspronkelijke kolomlengte; L2 = aangepaste kolomlengte
Gaschromatografie
Kolomparameters
Deeltjesgrootte van de stationaire fase (gepakte kolommen): Mag met maximaal 50% worden verlaagd; verhoging is niet toegestaan.
Filmdikte (capillaire kolommen): Instelbaar van -50% tot +100%.
Kolomlengte: Instelbaar binnen ±70%.
Binnendiameter van de kolom: instelbaar binnen ±50%.
Debiet: Instelbaar binnen ±50%.
Kolomtemperatuur: Instelbaar binnen ±10% ten opzichte van de opgegeven waarde.
Injectievolume en splitverhouding: Aanpassing is toegestaan, mits aan de eisen ten aanzien van piekgevoeligheid en herhaalbaarheid wordt voldaan.