Veelvoorkomende problemen bij vloeistofchromatografie (3)

2026-08-01

01 Basislijnverschuiving

Basislijnverschuiving is een veelvoorkomend probleem voor chromatografen. Het treedt vaak op bij routinetests, met name tijdens gradiëntelutie.

Over het algemeen is basislijnverschuiving normaal tijdens het equilibreren van de chromatografische kolom aan het begin van de analyse. Het equilibreren van de kolom duurt meestal meer dan 40 minuten. Een langere equilibratietijd is nodig als bufferoplossingen of bufferzouten worden gebruikt, of bij lage golflengten (

Temperatuurschommelingen in de kolom. Stabiliseer de temperatuur van de chromatografische kolom en de mobiele fase. Zorg ervoor dat er geen ramen of airconditioners direct op de kolomoven blazen.
Zelfs kleine temperatuurschommelingen kunnen basislijnfluctuaties veroorzaken. Dit treft vaak brekingsindexdetectoren, geleidbaarheidsdetectoren, UV-detectoren met lage gevoeligheid en andere foto-elektrische detectoren. Regel de temperatuur van de kolom en de mobiele fase; installeer een warmtewisselaar vóór de detector.
Verontreinigde flowcel of ingesloten gas. Spoel de flowcel door met methanol of andere sterke polaire oplosmiddelen (koppel eerst de chromatografiekolom los). Gebruik indien nodig 1 N salpeterzuur (gebruik geen zoutzuur).
De lamp levert onvoldoende energie. Vervang de lamp door een nieuwe.
Verontreinigde of aangetaste mobiele fase, of mobiele fase bereid met oplosmiddelen van lage kwaliteit; onvoldoende menging van de mobiele fase. Controleer de samenstelling van de mobiele fase; gebruik hoogwaardige reagentia en oplosmiddelen van HPLC-kwaliteit.
Variatie in de verhouding van de mobiele fase (exclusief gradiëntprogramma's). Controleer de doseerklep, de menger en andere componenten op afwijkingen.
Verontreinigde chromatografiekolom. Spoel de kolom door of vervang deze.

02 Basisruis

Bij UV-detectoren moet de deuteriumlamp na het inschakelen meer dan 30 minuten worden voorverwarmd om een stabiele basislijn te verkrijgen. Ruis verwijst naar willekeurige fluctuaties in de uitgangssignalen van de detector die geen verband houden met de te analyseren stoffen, en wordt onderverdeeld in kortstondige ruis en langdurige ruis.

Wanneer een deuteriumlamp lange tijd is gebruikt en het einde van zijn levensduur nadert (levensduur: circa 2000-4000 uur), neemt de basisruis aanzienlijk toe en is tijdige vervanging noodzakelijk. Naast de lichtbron kunnen ook luchtbellen in het stromingspad ruis veroorzaken.

Om te bepalen of verhoogde basisruis afkomstig is van lampveroudering of luchtbellen in het stromingspad: stop de pomp en blijf de basisruis monitoren. Als de ruis onmiddellijk verdwijnt en de basisruis vlak wordt, zijn luchtbellen in de mobiele fase de oorzaak; voer ontgassing uit. Als de ruis aanhoudt na het stoppen van de pomp, moet een defecte lamp worden vermoed. Daarnaast kan een te hoge bemonsteringsfrequentie leiden tot verhoogde basisruis.

Normale basislijnruis

Oorzaken van regelmatige basisruis: lucht ingesloten in de mobiele fase, detector of pomp; vloeistoflekkage; onvolledige menging van de mobiele fase; temperatuureffecten (te hoge kolomtemperatuur, niet-verwarmde detector); andere elektronische apparaten die hetzelfde stroomcircuit delen; pomppulsatie.

Preventieve maatregelen tegen basisruis: ontgas de mobiele fase vóór monsterinjectie; spoel het systeem door om lucht uit de detector of pomp te verwijderen; controleer op losse slangkoppelingen, pomplekkage, zoutafzetting en abnormale ruis; vervang indien nodig de pompafdichtingen. Homogeniseer oplosmiddelen door handmatig te schudden, of gebruik oplosmiddelen met een lage viscositeit om afwijkingen te verminderen, of installeer een warmtewisselaar. Koppel het LC-systeem, de detector en de recorder los als er andere elektronische apparatuur is aangesloten, identificeer externe interferentie en verhelp deze. Installeer een pulsdemper om pomppulsaties te onderdrukken.

Onregelmatige basislijnruis

Vloeistoflekkage: Controleer op losse koppelingen, pomplekkage, zoutafzetting en abnormale geluiden. Vervang afdichtingen indien nodig; inspecteer de flowcel op lekkage.
Verontreinigde, gedegradeerde mobiele fase of mobiele fase bereid met oplosmiddelen van lage kwaliteit: controleer de samenstelling van de mobiele fase.
Niet-mengbare oplosmiddelen voor de mobiele fase: Kies onderling mengbare componenten voor de mobiele fase.
Defecte elektronische componenten in de detector/recorder: Schakel de detector en recorder uit voor inspectie en probleemoplossing.
Luchtbellen in het systeem: Spoel het systeem met sterke polaire oplosmiddelen. Als er luchtbellen in de detector aanwezig zijn, reinig dan de detector en installeer een tegendrukregelaar na de detector.
Verontreinigde flowcel (sporen van verontreinigingen kunnen ruis veroorzaken): Reinig de flowcel met salpeterzuur.
De detectorlamp heeft onvoldoende energie: vervang de lamp.
Verlies van vulmateriaal of verstopping van de chromatografische kolom: Vervang de kolom.
Onvoldoende menging van de mobiele fase of een defecte menger: Repareer of vervang de menger. Het gebruik van de pompmenger wordt afgeraden voor isocratische methoden.