Veelvoorkomende HPLC-problemen (4)

2026-08-21

Veelvoorkomende problemen en oplossingen (deel 1)

De tegendruk in de kolom vereist nauwlettende aandacht tijdens HPLC-processen. Een stabiele tegendruk is nauw verbonden met de kwaliteit van de piekvorm, de kolomefficiëntie, de scheidingsprestaties en de retentietijd. Een stabiele tegendruk betekent niet een constante, vaste waarde; de drukschommeling moet binnen een bereik van 345 kPa of 50 PSI liggen. Vloeiende en langzame drukvariaties zijn acceptabel bij gradiëntelutie. Zowel een te hoge als een te lage druk worden beschouwd als drukgerelateerde fouten.

01 Plotselinge drukstijging

Het wordt over het algemeen veroorzaakt door een blokkade in het stromingspad. Voer de volgende stapsgewijze probleemoplossing uit:

(1) Koppel de inlaatpoort van de vacuümpomp los. De PEEK-slang is gevuld met vloeistof. Plaats de PEEK-slang onder de fles met oplosmiddelreservoir en observeer of er vrijelijk vloeistof uit druppelt. Als er geen vloeistof druppelt of als de vloeistof zeer langzaam druppelt, is het inlaatfilter van het oplosmiddel verstopt.

OplossingWeek het filter een half uur in 30% salpeterzuur en spoel het daarna grondig af met ultragezuiverd water. Als er vrijelijk vloeistof uit druppelt, is het oplosmiddelinlaatfilter in orde; ga verder met de volgende controle.

(2) Koppel de kolominlaatfitting los. Als de druk niet significant daalt, is de zespoorts injectieklep verstopt. OplossingSpoel de zeswegklep door. Als de druk weer normaal is, ga dan verder met de probleemoplossing.

(3) Koppel het uiteinde van de kolomuitgang los. Als de druk hoog blijft, is de HPLC-kolom verstopt.

Oplossing:

- Bij verstoppingen veroorzaakt door bufferzouten: spoel met 95% water totdat de druk weer normaal is.

- Bij verstoppingen veroorzaakt door sterk hechtende stoffen: spoel met een oplosmiddel voor de mobiele fase dat sterker is dan de huidige mobiele fase totdat de druk stabiliseert.

Als de druk na langdurig spoelen met de bovengenoemde oplosmiddelen niet afneemt, sluit dan de inlaat en uitlaat van de kolom om op het instrument en spoel met de mobiele fase. Als terugspoelen de druk nog steeds niet verlaagt, kan het vervangen van de filter in de kolominlaat worden overwogen. Let op: onjuist gebruik kan de efficiëntie van de kolom gemakkelijk verminderen, dus deze maatregel moet spaarzaam worden toegepast. Vervang de HPLC-kolom als het probleem aanhoudt.

Onjuiste debietinstelling: reset naar het juiste debiet.
Onjuiste samenstelling van de mobiele fase: verschillende verhoudingen van de mobiele fase leveren verschillende viscositeitscoëfficiënten op. Mobiele fasen met een hogere viscositeit genereren een hogere systeemdruk. Schakel waar mogelijk over op oplosmiddelen met een lagere viscositeit of pas de verhoudingen van de mobiele fase aan.
Nulpuntdrift van de systeemdruk: kalibreer het nulpunt van de druksensor opnieuw.

02 Geleidelijke drukstijging

Een geleidelijke drukstijging wordt meestal veroorzaakt door verontreiniging van de kolom, als gevolg van langdurig gebruik of adsorptie van het monster.

OplossingSpoel de kolom gedurende 12 uur terug met zuivere isopropanol met een debiet van 0,2 ml/min. Observeer of de druk daalt. Als de druk daalt, sluit u de kolom weer aan in de voorwaartse richting en spoelt u deze gedurende 2 uur met zuivere methanol met een debiet van 0,2 ml/min om de resterende isopropanol volledig te verdringen. De kolom kan vervolgens weer in normale werking worden genomen.

03 Lage druk

Meestal veroorzaakt door een lek in het systeem. OplossingControleer alle verbindingen, met name de fittingen aan beide uiteinden van de chromatografiekolom; draai lekkende verbindingen vast. Verwijder de kolom en draai de fittingen vast met het juiste aanhaalmoment of installeer PTFE-hulzen.
Luchtbellen in de pomp. Symptomen zijn vaak een instabiele, fluctuerende druk; ernstige luchtinsluiting kan ervoor zorgen dat de pomp geen mobiele fase meer kan aanzuigen.
OplossingOpen de ontluchtingsklep en spoel met een debiet van 3-5 ml/min. Als het probleem aanhoudt, verwijder dan handmatig luchtbellen via de ontluchtingsklep met behulp van een spuit.
Geen uitstroom van de mobiele fase: controleer het volume van de mobiele fase in de oplosmiddelreservoirs, bevestig dat de oplosmiddelinlaatfilters ondergedompeld zijn in de vloeistof en controleer de werkingsstatus van de pomp.